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SP Beadose FF琼脂糖图片
产品货号:
GS4364
中文名称:
SP Beadose FF琼脂糖
英文名称:
SP Beadose FF
产品规格:
25mL|100mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

SP Beadose 6FF琼脂糖,DEAE Beadose 6FF琼脂糖,Q Beadose 6FF琼脂糖和CM Beadose 6FF琼脂糖是离子交换类型的纯化树脂,具有较好的流动性,高负荷性,高流通性以及强物理和化学稳定性,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。本制品四种离子交换树脂均以高交联的6%琼脂糖为介质,可耐受较高的流速及更高的化学稳定性,适合实验室及工业大规模纯化。




树脂类型Q Beadose
6FF琼脂糖
DEAE Beadose
6FF琼脂糖
SP Beadose
6FF琼脂糖
CM Beadose
6FF琼脂糖
货号GS4362GS4363GS4364GS4365
离子交换类型强阴离子弱阴离子强阳离子弱阳离子
总离子载量0.18~0.25mmol
(Cl-)/mL树脂
0.11~0.16mmol
(Cl-)/mL树脂
0.18~0.25mmol
(H+)/mL介质
0.09~0.13mmol
(H+)/mL介质
电荷-O-CH2CHOHCH2-N+(CH3)3-OCH2CH2N+(CH2CH3)2-OCH2CH2CH2SO3--O-CH2COO-
结合能力120mg人血清
蛋白/mL树脂
110mg人血清
蛋白/mL树脂
70mg核糖核
酸酶/mL树脂
50mg核糖核
酸酶/mL树脂
压力/流速400~700cm/h,
100kPa,
柱高15cm,
内径5cm
300~600cm/h,
100kPa,
柱高15cm,
内径5cm
400~700cm/h,
100kPa,
柱高15cm,
内径5cm
300~600cm/h,
100 kPa,
柱高15cm,
内径5cm
pH稳定性2~14 (短期)
2~12 (长期)
2~14(短期)
2~12(长期)
3~14(短期)
4~12(长期)
2~14(短期)
4~13(长期)
基质 6%高度交联琼脂糖
化学稳定性在所有常用溶液中稳定:8M尿素,6M盐酸胍,70%乙醇,1M氢氧化钠,1M乙酸钠
储存缓冲液 20%乙醇(Q,DEAE,CM),含0.2M醋酸钠的20%乙醇(SP)
粒度范围
(颗粒大小)
90μm(45~165μm)



组分25mL100mL
SP Beadose FF琼脂糖25mL100mL
说明书1份1份

保存:2~8℃,不可冻存


  • Buffer的准备:
    • 所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
    • 原则上离子交换是低盐结合高盐洗脱,Binding Buffer根据您需要的结合pH条件选择在这个pH下最适的缓冲液,常规有磷酸盐,Tris,碳酸盐,醋酸盐等,推荐浓度10~100mM。
    • Wash Buffer与Elution Buffer在Binding Buffer的基础上补加氯化钠,可以设定不同氯化钠梯度进行洗杂洗脱,推荐的浓度是0.1M,0.3M,0.5M,1M。建议做样品小试,以确定最佳洗杂洗脱浓度。
    注:
    ① 对于DEAE和Q Beadose 6FF琼脂糖来说,Binding Buffer必须至少高于待结合分子的等电点(pI)一个pH单位。
    ② 对于CM和SP Beadose 6FF琼脂糖来说,Binding Buffer必须至少低于待结合分子的等电点(pI)一个pH单位。不同pH值的缓冲液可以参考表2和表3。
  • 样品准备:
    以CM Beadose 6FF为例
    样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
  • 样品纯化:
    • 将介质装入合适的层析柱,层析用5倍柱体积的Binding Buffer进行平衡,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
    • 将样品加到平衡好的CM Beadose 6FF中(保证目的蛋白与CM Beadose 6FF充分接触,提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
    • 使用10~15倍柱体积的Wash Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
    • 使用5~10倍柱体积的Elution Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。
    • 依次使用3倍柱体积的Binding Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。
  • SDS-PAGE检测:
    将使用纯化产品得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品用SDS-PAGE检测纯化效果。



离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗,然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP(Cleaning In Place)清洗:
离子交换树脂可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
去除一些沉淀或变性物质,建议使用下面的方法:
用2倍柱体积的1M NaOH溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的1X PBS,pH7.4清洗。
去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质:
用3~4倍柱体积的70%乙醇或3~4倍柱体积的1% Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的1XPBS,pH7.4清洗。
去除一些离子键结合物质:
用3~4倍柱体积的2M NaCl清洗,然后立即用5倍柱体积的1X PBS,pH7.4清洗。


问题原因分析推荐解决方案
柱子反压过高填料被堵塞进行树脂清洗。
裂解液中含有微小的固体颗粒,
建议上柱前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤
洗脱样品较杂树脂重复多次使用进行树脂清洗或更换新的填料
平衡不充分增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂



表2:建议用于DEAE Beadose 6FF琼脂糖和Q Beadose 6FF琼脂糖的缓冲液
缓冲液反离子浓度(mM)pKa(25℃)
N-甲基哌嗪Cl-204.8
哌嗪Cl-,HCOO-205.7
L-组氨酸Cl-206.0
Bis-TrisCl-206.5
1,3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷Cl-206.8
三羟乙基胺Cl-,CH3COO-207.8
TrisCl-208.1
N-甲基二乙醇胺Cl-,CH3COO-,SO42-508.5
二乙醇胺Cl-20(pH8.4)
50(pH8.8)
8.9
1,3-丙二胺Cl-208.6
乙醇胺Cl-209.5
哌嗪Cl-209.7
1,3-丙二胺Cl-2010.5

表3:建议用于CM Beadose FF琼脂糖和SP Beadose FF琼脂糖的缓冲液
缓冲液反离子浓度(mM)pKa(25℃)
柠檬酸盐Na+,Li+203.1
乙酸盐Na+,Li+504.8
丙二酸盐Na+,Li+505.7
磷酸盐Na+507.2
N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸Na+508.4

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