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SP Beadose 6FF琼脂糖，DEAE Beadose 6FF琼脂糖，Q Beadose 6FF琼脂糖和CM Beadose 6FF琼脂糖是离子交换类型的纯化树脂，具有较好的流动性，高负荷性，高流通性以及强物理和化学稳定性，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。本制品四种离子交换树脂均以高交联的6%琼脂糖为介质，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。

树脂类型	Q Beadose 6FF琼脂糖	DEAE Beadose 6FF琼脂糖	SP Beadose 6FF琼脂糖	CM Beadose 6FF琼脂糖
货号	GS4362	GS4363	GS4364	GS4365
离子交换类型	强阴离子	弱阴离子	强阳离子	弱阳离子
总离子载量	0.18～0.25mmol (Cl-)/mL树脂	0.11～0.16mmol (Cl-)/mL树脂	0.18～0.25mmol (H+)/mL介质	0.09～0.13mmol (H+)/mL介质
电荷	-O-CH2CHOHCH2-N+(CH3)3	-OCH2CH2N+(CH2CH3)2	-OCH2CH2CH2SO3-	-O-CH2COO-
结合能力	120mg人血清 蛋白/mL树脂	110mg人血清 蛋白/mL树脂	70mg核糖核 酸酶/mL树脂	50mg核糖核 酸酶/mL树脂
压力/流速	400~700cm/h, 100kPa， 柱高15cm， 内径5cm	300~600cm/h， 100kPa， 柱高15cm， 内径5cm	400~700cm/h， 100kPa， 柱高15cm， 内径5cm	300~600cm/h， 100 kPa， 柱高15cm， 内径5cm
pH稳定性	2~14 (短期) 2~12 (长期)	2~14(短期) 2~12(长期)	3~14(短期) 4~12(长期)	2~14(短期) 4~13(长期)
基质	6%高度交联琼脂糖
化学稳定性	在所有常用溶液中稳定：8M尿素，6M盐酸胍，70%乙醇，1M氢氧化钠，1M乙酸钠
储存缓冲液	20%乙醇(Q，DEAE，CM)，含0.2M醋酸钠的20%乙醇(SP)
粒度范围 (颗粒大小)	90μm(45～165μm)

组分	25mL	100mL
SP Beadose FF琼脂糖	25mL	100mL
说明书	1份	1份

保存：2～8℃，不可冻存

• Buffer的准备：
  
  • 所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
    
  • 原则上离子交换是低盐结合高盐洗脱，Binding Buffer根据您需要的结合pH条件选择在这个pH下最适的缓冲液，常规有磷酸盐，Tris，碳酸盐，醋酸盐等，推荐浓度10～100mM。
    
  • Wash Buffer与Elution Buffer在Binding Buffer的基础上补加氯化钠，可以设定不同氯化钠梯度进行洗杂洗脱，推荐的浓度是0.1M，0.3M，0.5M，1M。建议做样品小试，以确定最佳洗杂洗脱浓度。
  注：
  ① 对于DEAE和Q Beadose 6FF琼脂糖来说，Binding Buffer必须至少高于待结合分子的等电点(pI)一个pH单位。
  ② 对于CM和SP Beadose 6FF琼脂糖来说，Binding Buffer必须至少低于待结合分子的等电点(pI)一个pH单位。不同pH值的缓冲液可以参考表2和表3。
• 样品准备：
  以CM Beadose 6FF为例
  样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
  
• 样品纯化：
  
  • 将介质装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的Binding Buffer进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
    
  • 将样品加到平衡好的CM Beadose 6FF中(保证目的蛋白与CM Beadose 6FF充分接触，提高目的蛋白的回收率)，收集流出液。
    
  • 使用10～15倍柱体积的Wash Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
    
  • 使用5～10倍柱体积的Elution Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
    
  • 依次使用3倍柱体积的Binding Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
• SDS-PAGE检测：
  将使用纯化产品得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品用SDS-PAGE检测纯化效果。

离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP(Cleaning In Place)清洗：
离子交换树脂可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法：
用2倍柱体积的1M NaOH溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的1X PBS,pH7.4清洗。
去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质：
用3～4倍柱体积的70%乙醇或3～4倍柱体积的1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的1XPBS,pH7.4清洗。
去除一些离子键结合物质：
用3～4倍柱体积的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的1X PBS,pH7.4清洗。

问题	原因分析	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	进行树脂清洗。
		裂解液中含有微小的固体颗粒， 建议上柱前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤
洗脱样品较杂	树脂重复多次使用	进行树脂清洗或更换新的填料
	平衡不充分	增加平衡液体积，确保树脂充分平衡/洗杂

表2：建议用于DEAE Beadose 6FF琼脂糖和Q Beadose 6FF琼脂糖的缓冲液

缓冲液	反离子	浓度(mM)	pKa(25℃)
N-甲基哌嗪	Cl-	20	4.8
哌嗪	Cl-，HCOO-	20	5.7
L-组氨酸	Cl-	20	6.0
Bis-Tris	Cl-	20	6.5
1,3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷	Cl-	20	6.8
三羟乙基胺	Cl-，CH3COO-	20	7.8
Tris	Cl-	20	8.1
N-甲基二乙醇胺	Cl-，CH3COO-，SO42-	50	8.5
二乙醇胺	Cl-	20(pH8.4) 50(pH8.8)	8.9
1,3-丙二胺	Cl-	20	8.6
乙醇胺	Cl-	20	9.5
哌嗪	Cl-	20	9.7
1,3-丙二胺	Cl-	20	10.5

表3：建议用于CM Beadose FF琼脂糖和SP Beadose FF琼脂糖的缓冲液

缓冲液	反离子	浓度(mM)	pKa(25℃)
柠檬酸盐	Na+，Li+	20	3.1
乙酸盐	Na+，Li+	50	4.8
丙二酸盐	Na+，Li+	50	5.7
磷酸盐	Na+	50	7.2
N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸	Na+	50	8.4

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